Alpha突触核蛋白操作指南(4)—沉降测试实验步骤

沉降测试实验步骤 

StressMarq Biosciences Inc

1. 将40μL的PFF移入微量离心管中(最好是螺帽管）。

2. 最大速度离心60分钟。

3. 小心将上清液 (40μL) 转移到新管中。添加10μL的5X Laemmli缓冲液并标记为“上清液”。

4. 将沉淀悬浮于40μL PBS中，再次最大速度离心30分钟。保存上清液并标记为 “洗涤” 。

5. 将沉淀物悬浮在40μL PBS 中并标记为 “沉淀物” ，向该部分添加10μL 5X Laemmli 缓冲液。

6. 90°C 孵育10分钟。

7. 分别加样10μL “上清液”，“洗涤”和“沉淀物”于15孔梳SDS-PAGE凝胶，然后进行SDS-PAGE。考马斯亮蓝染色和脱色。我们希望大部分的alpha突触核蛋白(>75%)存在于“沉淀物 ”中。

 

注意：原始操作步骤建议使用40μL，但我们发现20μL也可以，并能节省样品。此外，我们有时会在第二次离心时运行60分钟，而不是建议的30分钟，以确保获得更好的沉淀物。该沉降试验应在在原纤化结束时进行，之后再稀释和分装。

 

 

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