热点产品: OneComp eBeads荧光补偿微球

 
为什么要调节补偿？
流式细胞仪的荧光补偿隔一段时间之后需要调整到适合的位置。如果荧光补偿没有调节好，会导致细胞分群不明显或者流式检测得到的结果图非常不漂亮，而且会影响到检测结果的不真实。荧光补偿的调节对初学者来说非常不容易掌握，同时，补偿调节是流式细胞术中比较难掌握的操作。尤其是一些不常见的标志检测时，需要经验非常丰富的流式操作者根据多年的经验判断调节补偿，才可以得到比较好的数据和图片。
 
荧光染料发射光谱的重叠

FITC和PE间的重叠就是一个光谱重叠的示例。在单染FITC过程中必须减去或者补偿PE通道出来的荧光。
如何调节补偿？
 

• 调节光电倍增管的电压
• 检测每种荧光素的自发荧光
• 设置每种荧光素的单染对照（阳性表达）。

什么是单染对照？
 

• 阴性细胞
• 补偿微球

细胞似乎是一个不错的选择，但微球却非常好的替代细胞，因为细胞来源可能有限或感兴趣的抗原表示在低水平。
调节补偿要注意：
 

• 通常要准备一管没有染色的细胞以调节PMT电压。
• 不能用阴性（不染色的）微球来设置电压。

 
OneComp eBeads
补偿微球
 原理：

OneComp eBeads 微球大约是淋巴细胞的大小,可连接各种荧光标记的抗体作为调节补偿使用。每滴微球中都含有两群：一群是可以结合抗体的阳性群，一群是不会与抗体反应的阴性群。
 
产品目录号： cat# 01-1111        规格：100 tests
 
 

• 使用方便，一滴即可。
• 与所有小鼠、大鼠和仓鼠来源的抗体反应，无论它们的轻链是kappa还是lambda。
• 适用于各种激发光：

           
*适用于488 nm 蓝光，532 nm 绿光，561 nm 黄光，633-635 nm 红光，应用于405nm 紫光的荧光素中只需对eFluor® 450 进行过优化。
 
OneComp eBeads 的优点：
 

• 确保正确的补偿，以保证正确的阳性率和阴性率。
• 微球可增强信号，优化补偿。
• 样本细胞中抗原可能会表达比较弱，而致补偿不准确。
• 多色流式细胞实验中，双峰分布可以用于单色补偿对照。
• 如果您记准备补偿样品时，补偿微球准备起来非常快捷。
• 细胞来源有限时，微球是最好的补偿取代品。
• 微球最适合于6 -12色分析的补偿调节。

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操作步骤：
1.  准备好流式管，每种荧光抗体一个；
2.  将微球翻转或者涡旋混匀；
3.  在每管中加入一滴微球；
4.  在管中分别加入相应的1 test 抗体（不同抗体1 test 的用量不同，具体参见说明书）；
5.  敲击或者涡旋混匀；
6.  2-8℃暗处孵育15-30 分钟；
7.  每管加2ml 流式染色缓冲液，400-600 x g 离心3-5 分钟；
8.  弃上清，每管加入0.2-0.4 mL 流式染色缓冲液；
9.  混匀后上机分析。