TriLink 新品 | 专为 saRNA 设计的体外转录试剂盒，高效加帽、低免疫原性、长效表达

自扩增 RNA（self-amplifying RNA, saRNA，又称自复制RNA self-replicating RNA, srRNA）凭借可细胞内自我复制、长效蛋白表达、低给药剂量等独特优势，成为新一代疫苗、肿瘤免疫与基因治疗领域的热门研发方向。

但 saRNA 的研发一直面临诸多技术壁垒：如长片段 RNA 转录产率不理想、dsRNA 杂质诱发强烈先天免疫、5’端加帽不匹配导致复制能力丧失等。

为解决这些痛点，TriLink推出了专门针对 saRNA 开发的一体化 IVT 试剂盒（货号 K-7114-20），该试剂盒提供saRNA合成所需的全套核心组分，包括帽类似物、修饰与未修饰核苷三磷酸、IVT 酶、反应缓冲液以及对照 DNA 模板。

按照推荐的操作流程，该试剂盒可完成 20 次 20 μL 的反应。试剂盒单次 20 μL 反应最高可产出 150-190 μg 带帽 saRNA（氯化锂纯化后的粗产率，浓度最高可达 7.5-9.5 mg/mL）；整套 20 次反应的试剂盒总产出约 3.0-3.8 mg。


主要优势：

• 节约时间与成本：共转录加帽方案，单管即可完成全部反应；产率高、操作步骤少，减少实验操作。

• 高加帽效率：搭配 CleanCap^® AU 帽类似物，生成 Cap 1帽子，加帽效率＞95%。

• saRNA 产量提升：依托 TriLink 专有的 CleanScript^® IVT 体系配方，以 2.4 μg 线性质粒为模板，单次 20 μL 反应最高可获得 150‑190 μg 带帽 saRNA。

• dsRNA杂质含量极低：采用 CleanScribe™ RNA 聚合酶替代野生型 T7 RNA 聚合酶，配合 CleanScript IVT 体系，双链 RNA 杂质最高可降低 85%（具体效果因修饰类型而异）。

• saRNA 性能增强：使用CleanCap AU、CleanScribe RNA 聚合酶搭配 5-甲基胞苷（5mC）合成的 saRNA，蛋白表达效果好，炎症反应低。

数据展示：

图一：CleanCap^® AU saRNA IVT Kit相较于常规IVT Kit所生成的WT saRNA和5mC修饰saRNA在产量，纯度以及完整性上表现更优。

图二：CleanScribe™ RNA 聚合酶相较于野生型T7 RNA 聚合酶，在 saRNA合成中可显著降低 dsRNA 杂质的生成且产量几乎没有损失，该酶不会破坏 RNA 完整性，转录产物全长质量与野生型T7 RNA 聚合酶相当。

图三：CleanCap AU可以实现优异的蛋白翻译表达。当两种帽子加帽效率都＞95%时，对于 VEEV 骨架 saRNA，AU-Cap 的蛋白表达能力显著优于传统 AG-Cap。

图四：未经核苷修饰但搭载 CleanCap AU 帽的自扩增 RNA（saRNA，曲线 A），与经 N1-甲基假尿嘧啶（N1MePsU）修饰且搭载 CleanCap M6 帽的常规 mRNA（曲线 B）分别转染 HEK293T 细胞后，进行蛋白表达情况对比，saRNA相比普通 mRNA，蛋白表达水平更高、持续时间更长。

图五：不同IVT制备的saRNA递送后的A549细胞活力比对。5 mC修饰提高了细胞耐受性，证实5mC修饰能通过抑制先天免疫激活，有效改善转染后细胞的耐受性与生存状态。


重要提示：

1. 本试剂盒专为 CleanCap^® AU 加帽的 saRNA 体外转录而专门配制和优化，不适合常规 mRNA 合成，也不建议搭配其他类型的帽类似物使用。

2. 用户需要自行设计并准备IVT模板；PCR 模板尚未在 saRNA 体系完成验证，必须使用完全线性化的质粒模板。

试剂盒组分:

• CleanCap^® Reagent AU

• Adenosine-5′-Triphosphate (ATP)

• Cytidine-5′-Triphosphate (CTP)

• Guanosine-5′-Triphosphate (GTP)

• Uridine-5′-Triphosphate (UTP)

• 5-Methylcytidine-5′-Triphosphate (5mC)

• AU CleanScribe™ RNA Polymerase Mix

• 10X AU CleanScript™ IVT Buffer

• saRNA FLuc Control DNA Template (linearized)

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