小鼠：选择一种品系的小鼠

DBA/1 (DBA)小鼠 或 C57BL/6 (B6)小鼠

l  7-8周小鼠

l  SPF级动物房

l  高脂饮食

 

推荐佐剂和胶原蛋白：选择1种佐剂+ 1种胶原蛋白

 

货号	佐剂		货号	骨胶蛋白
7002	Incomplete Freund’s Adjuvant (IFA) (DBA - Booster only)		20011	Chick Type II Collagen, Lyophilized (DBA or B6)
7008	Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 1 mg/ml (DBA)		20012	Chick Type II Collagen, 2 mg/ml Solution (DBA or B6)
7001	Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 4 mg/ml (DBA)		20021	Bovine Type II Collagen, Lyophilized (DBA)
7023	Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 5 mg/ml (B6)		20022	Bovine Type II Collagen, 2 mg/ml Solution (DBA)

 

 

免疫方案

方案1: 单一免疫 (DBA mice)

Day 0: 皮下注射:胶原乳剂加CFA: 4mg /ml结核分枝杆菌

Day 0 - 28: 每7天给关节炎评分

Day 28 - 56: 每2-3天给关节炎评分：关节炎发病率90 - 100%

Day 56: 实验结束。

或

方案 2: 加强免疫

Day 0: 皮下注射:含CFA的胶原乳剂:1mg /ml (DBA)或5mg /ml结核分枝杆菌(B6)

Day 0 - 28: 每7天给关节炎评分

Day 21: 皮下注射(加强剂):胶原乳剂配合IFA (DBA)或CFA：5mg /ml结核分枝杆菌(B6)

Day 28 - 56: 每2-3天给关节炎评分：关节炎发病率90 - 100% (DBA)，50-70% (B6)

Day 56: 实验结束。

 

用匀浆器准备乳剂：不要使用两个注射器方法

 

步骤*:

1. 准备材料 (图1. Homogenizer blade浆式匀浆器 (a), 带有三通旋塞的10mL注射器 (b) 和1 ml Hamilton 注射器 (c)).

2. 锁开关。

3. 保持在冰上(图2)。

4. 注射器中加入CFA。

5. 逐滴滴入等量的胶原蛋白溶液(图3)。

6. 以10,000 - 30,000 rpm混合2分钟。搅拌时，上下移动注射器。

7. 将注射器放入冰中冷却5分钟。

8. 以10,000 - 30,000 rpm混合2分钟。搅拌时，上下移动注射器。

9. 用乳滴试验评价乳剂

10. 用三通旋塞将乳剂转移到Hamilton注射器中。

 

乳滴聚结实验

免疫：

注射器中的乳剂 (没有气泡!)  (b) 注射针 (25或27-gauge x 5/8”)  (c) 限制装置

 

不要使用腹腔注射（IP）(a) 或 静脉注射 IV (b) 的方式注射小鼠

 

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