神经衰退疾病研究新工具---α-突触核蛋白寡聚体(SPR-484)

 StressMarq商业投产α-突触核蛋白寡聚体具有如下优点：

①高含量α-突触核蛋白寡聚体

②动态学稳定 (kinetically stable/trapped)

③不含任何诱导剂或抑制剂 (多巴胺，EGCG)

④可用于活性电泳 (Native PAGE)，体内体外检测及疾病建模

⑤stressmarq能够量产α-突触核蛋白寡聚体

 

 

上图为动态学稳定(kinetically stable) 的α-突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 电镜图。该寡聚体没有使用任何诱导剂或抑制剂来锁定寡聚体状态，并且寡聚体含量能达到90%。

 

Stressmarq的SPR-484 的负染色透射电子显微镜图像在 80 Kv 下使用磷钨酸和醋酸铀染色在碳涂层的 400 目铜网格上获得。可以清晰的看到寡聚体结构，并且具有很高的均匀性。 

 

动态学稳定的α突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 可在冻融后37℃下孵育两周仍然稳定 

(A)冻融一次后的动态学稳定寡聚体的Native PAGE 

(B)和(C)分别是冻融一次后的和37℃孵育两周后的尺寸排阻色谱(SEC)

 

在峰值处，90%SPR-484在冻融后37℃下孵育两周仍然稳定于寡聚体状态

 

动态学稳定的α突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 对多巴胺能神经元有毒性并且可以诱发帕金森病理现象(pSer129) 

(A) 经寡聚体处理后 11 天，大鼠原代多巴胺能神经元的存活率由抗 MAP2 抗体量化并表示为对照的百分比

(B) 经寡聚体处理后 11 天，大鼠原代多巴胺能神经元中存在的 α-突触核蛋白 pSer129 水平通过抗 α-突触核蛋白 pSer129 抗体与抗 MAP2 抗体的比率量化，表示为对照的百分比

 

所有数据经过统计学验证，而非偶然性结果 

动态学稳定的α突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 在大鼠原代多巴胺能神经元中诱导帕金森相关的pSer129病理现象 

(A)用对照PBS缓冲液处理后11天的大鼠原代多巴胺能神经元

(B) 用10 µg/mL SPR-484处理后11天的大鼠原代多巴胺能神经元

 

细胞核染色蓝色(Hoechst)，多巴胺能神经元显示红色(MAP2)，病理现象为绿色(α-syn pSer129)

 

注：SPR-484为E.coli 表达的，在加入神经元之前没有磷酸化

 

更多建模问题请见链接：https://www.jove.com/v/59758/generation-alpha-synuclein-preformed-fibrils-from-monomers-use

 

 

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