prozyme糖苷酶——内切糖苷酶

3711 人阅读发布时间：2015-08-11 15:18

糖苷酶亦称糖苷水解酶(glycoside hydrolase)。是用于各种糖苷或寡糖使糖苷键水解酶的总称。根据切割的糖的种类可分为内切糖苷酶（Endoglycosidase）和外切糖苷酶（Exoglycosidases）。内切糖苷酶是催化水解寡糖及多糖的内部糖苷键的酶，用于从糖蛋白上切割多糖的酶。其中内切糖苷酶F和内切糖苷酶H，可用于鉴别N-糖苷链的类型。内切糖苷酶F可断裂糖蛋白的天冬酰胺和甘露聚糖的糖苷键，内切糖苷酶H专一性水解两个N-乙酰氨基葡糖之间的 β(1，4)糖苷键，其底物主要是高甘露糖型和杂合型糖链。
Prozyme提供了包括PNGaseF、Endo-H、Endo F2、PNGaseA、O-Glycanase等的内切糖苷酶。
肽N- 糖苷酶 F，即 PNGase F，是一种酰氨酶，能够在N-连糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖部分最内侧的N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间进行切割。
糖苷内切酶H（Endo H）是从Streptomyces plicatus中克隆，在大肠杆菌中表达得到的重组糖苷酶。Endo H能够对N-糖蛋白中的高甘露糖和某些杂合型寡聚糖的壳二糖核心进行切割，而不切割复杂多糖。酶切反应切割寡糖二乙酰壳二糖核心的两个N-乙酰基葡糖胺残基，切割后保留天冬酰胺的一个N-乙酰葡糖胺残基。该特性与PNGase F（肽-N-糖苷酶 F）不同，它切割所有的天冬酰胺连接的寡糖。
重组内切糖苷酶F2（Endo F2）适于切除天然状态下蛋白质的N连接寡糖，特别是复杂型的寡糖，核心岩藻糖对酶切效果影响不大。Endo F2酶切位点位于无糖核心的两个N乙酰氨基葡萄糖间的糖苷键，酶切后，释放出截短的游离寡糖，蛋白质天冬酰胺残基上仍保留一个N乙酰氨基葡萄糖。某些寡糖链，由于其所处位置受蛋白空间结构的影响，使用经典的PNGaseF无法在天然状态下将寡糖切除，须将蛋白进行变性处理。Endo F2与PNGaseF相比，对蛋白的空间结构的影响不敏感，因此更适合酶切天然状态下蛋白质的N连接寡糖。

Prozyme提供的内切糖苷酶列表：

产品类型	产品名称	产品编号	规格
PNGaseF	N-Glycanase®	GKE-5006A	1 ea (100mU※ in 40 µl)
	N-Glycanase®	GKE-5006B	1 ea (200mU in 80 µl)
	N-Glycanase®	GKE-5006D	1 ea (1U in 400µl)
	N-Glycanase®-Ultra	GKE-5020B	1 ea (400mU in 40µl)
	N-Glycanase®-Ultra	GKE-5020D	1 ea (1U in 100µl)
	Glyko® N-Glycanase-PLUS	GKE-5010B	1 ea (400mU in 40µl)
	Glyko® N-Glycanase-PLUS	GKE-5010D	1 ea (1U in 100µl)
	Glyko® PNGase F (Chryseobacterium [Flavobacterium] meningosepticum)	GKE-5003	1 ea (100 mU (50 µl))
Endo-H	Glyko® Endoglycosidase H (recombinant gene from Streptomyces plicatus, expressed in E. coli)	GKE-5002	1 ea (30 mU (200 µl))
Endo F2	Glyko® Endo F2 (recomb Chryseobacterium [Flavobacterium] meningosepticum expressed in E. coli)	GKE-5008	1 ea (6 mU (60 µl))
PNGaseA	Glyko® PNGase A (almond)	GKE-5011A	1 ea (2mU)
PNGaseA	Glyko® PNGase A (almond)	GKE-5011B	1 ea (10mU)
O-Glycanase	Glyko® O-Glycanase (recombinant gene from Streptococcus pneumoniae, expressed in E.coli)	GK80090	1 ea (50 mU (40 µl))

※ 1 Prozyme Unit=1 IUB Unit

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